利用液氮罐低溫保存人體結膜上皮細胞的案例

利用MVE液氮罐低溫保存人體結膜上皮細胞的案例
 

目的：探索人眼結膜上皮細胞體外培養(yǎng)和細胞保存的最佳方法，建立人結膜上皮細胞系，進一步研究人結膜的病理、生理特點及為毒理試驗提供可靠的細胞模型。

方法：分別用組織塊培養(yǎng)法、機械分離法及混合消化液培養(yǎng)法體外培養(yǎng)正常成年人結膜上皮細胞，通過觀察細胞形態(tài)、生長特性并用原位免疫組化方法鑒定培養(yǎng)細胞;收集第3代和第4代融合的細胞液氮罐凍存，保存30天后復蘇，觀察復蘇成功率。

結果：3種取材方法中，混合消化液培養(yǎng)法細胞生長繁殖較快，培養(yǎng)細胞形態(tài)多樣，貼壁生長。免疫組化Keratin染色陽性，細胞凍存復蘇的成功率均達到90％。組織塊培養(yǎng)法細胞生長比較緩慢，而機械分離法細胞未見貼壁生長。

結論：混合消化液培養(yǎng)法是人結膜上皮細胞培養(yǎng)的最佳方法，通過液氮罐凍存可保存培養(yǎng)的人結膜上皮細胞。MVE液氮罐