利用液氮罐儲(chǔ)存細(xì)胞胚胎應(yīng)注意哪些問題

細(xì)胞和胚胎是生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中需要大量的超低溫冷藏的樣品，常規(guī)的方法有深冷冰箱儲(chǔ)存法，但是壓縮機(jī)不知什么時(shí)候會(huì)罷工，所以，采用MVE液氮罐的液氮超低溫儲(chǔ)存方法，就成了業(yè)內(nèi)使用最為廣泛的方法和技術(shù)。給您說說幾個(gè)關(guān)于液氮罐保存細(xì)胞和胚胎的知識(shí)點(diǎn)。

     

　　一、在細(xì)胞培養(yǎng)過程中的使用

　 　細(xì)胞培養(yǎng)的一般過程，主要包括準(zhǔn)備、取材、培養(yǎng)和凍存復(fù)蘇4步。為保存細(xì)胞，特別是不易獲得的突變型細(xì)胞或細(xì)胞株，要將細(xì)胞凍存。凍存的溫度一般用一 196℃液氮溫度，將細(xì)胞收集至凍存管中加入含保護(hù)劑(一般為二甲基亞砜或甘油)的培養(yǎng)基，以一定的冷卻速度凍存，最終保存于液氮罐中。在極低的溫度下，細(xì) 胞保存的時(shí)間幾乎是無限的。

　　目前美國標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞庫或細(xì)胞銀行(ATCC)液氮凍存有3200個(gè)已經(jīng)過鑒定的細(xì)胞系(1992)，其中包括來自正常人和各種疾病患者的皮膚成纖維細(xì)胞系和來自不同物種的近75個(gè)雜交瘤細(xì)胞株。

　　二、胚胎冷凍保存技術(shù)

　 　胚胎冷凍保存技術(shù)是指在低溫條件下利用低溫保護(hù)劑保存胚胎的一門技術(shù)。這一技術(shù)是20世紀(jì)后半葉隨著人工授精技術(shù)廣泛應(yīng)用而產(chǎn)生的，目前已成為了現(xiàn)代生 命科學(xué)研究必備的手段之一。動(dòng)物胚胎的冷凍保存原理就是因?yàn)榈蜏亟档土伺咛?nèi)的變質(zhì)反應(yīng)速度，溫度越低，胚胎保存時(shí)間就越長(zhǎng)。

　　目前已研究出多種胚胎冷凍保存方法，包括慢速冷凍法、快速冷凍法、一步冷凍法、直接移植冷凍法和玻璃化冷凍法等。其中玻璃化冷凍法的步驟如下：

　　①將胚胎在室溫下放人25%玻璃化溶液(VS液)中預(yù)處理15min;

　　②將預(yù)處理后的胚胎放在高濃度(75%一90%)的VS液中保存20—40min;

　　③將經(jīng)過兩步抗凍劑處理的胚胎直接投入液氮中保存。

　　此外還可以用MVE液氮罐保存菌種、疫苗、骨組織、精子等物質(zhì)，均可達(dá)到很好的長(zhǎng)期存儲(chǔ)的效果。

      常用胚胎和細(xì)胞保存液氮罐為廣口翻蓋型液氮罐，如YDS-110-290F型  YDS-100-200F型 里面配多層凍存管提籃，用來保存細(xì)胞等樣品。大型液氮罐一罐可保存七八千只凍存管，對(duì)于細(xì)胞保存，也是一個(gè)超大的容器。